使用色差儀法分析番茄果實(shí)中番茄紅素的含量是一種簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的方法。該方法利用了番茄紅素吸收紫外光的特性,在特定波長(zhǎng)下測(cè)量番茄紅素濃度。
番茄紅素是形成番茄成熟果實(shí)及其制品顏色特性的主要色素,其含量可作為果實(shí)顏色性狀研究的一個(gè)指標(biāo)。為了對(duì)番茄果實(shí)番茄紅素的含量進(jìn)行定量的分析,就可以借助于色差儀。本文介紹了色差儀在番茄果實(shí)番茄紅素含量分析中的應(yīng)用。
番茄紅素是一種脂溶性的類胡蘿卜素,具有較強(qiáng)的抗氧化性,對(duì)人類內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡、腫瘤的發(fā)生有抑制作用。最新研究還表明,限制食用番茄紅素可導(dǎo)致氧化應(yīng)激的顯著增加并促使骨骼釋放鈣離子。番茄果實(shí)中番茄紅素含量豐富,是天然番茄紅素的主要來源。在番茄果實(shí)品質(zhì)性狀的研究中,番茄紅素含量是重要指標(biāo)之一。常用的番茄紅素測(cè)定方法主要有分光光度計(jì)法和高效液相色譜法,均需要進(jìn)行樣本處理和番茄紅素提取。為了提高測(cè)定效率、避免破壞樣品,采用快速無(wú)損檢測(cè)番茄紅素含量就顯得非常的重要,而色差儀法正好可以滿足這一需求。
色差儀法就是通過使用色差儀,自動(dòng)比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣板與被檢品之間的顏色差異,直接輸出CIELAB的L、a、b三組數(shù)據(jù),根據(jù)L、a、b值判別顏色及其亮度。色差儀操作簡(jiǎn)單快捷,是目前適宜進(jìn)行顏色無(wú)損檢測(cè)的儀器,能夠?qū)Ψ压麑?shí)顏色進(jìn)行精確測(cè)量。
用色差儀測(cè)定番茄果實(shí)的顏色,獲得L、a、b值。隨機(jī)選擇充分成熟的果實(shí),沿果面赤道一周均勻取3個(gè)點(diǎn),得出L、a、b的數(shù)值后取平均值。每份材料測(cè)定3個(gè)果實(shí),每個(gè)果實(shí)重復(fù)測(cè)定3次。色差儀的3個(gè)讀數(shù)分別具有不同的功能。L值反映顏色的明亮程度,0表示黑色,100表示白色。a值反映紅色或綠色物質(zhì)的濃度,a>0表示顏色偏紅,a<0表示顏色偏綠。b值反映橙色或藍(lán)色物質(zhì)的濃度,b>0表示顏色偏橙,b<0表示顏色偏藍(lán)。
色度值反映色素的濃度,色度越大,顏色越鮮艷;色調(diào)值反映紅橙綠藍(lán)紫等顏色類型以及這些基本色之間的過渡顏色,180°表示純綠色,90°表示橙色,45°表示橘紅色,0°表示純紅色;色光值反映物質(zhì)的表面顏色。根據(jù)測(cè)定的a、b及L值分別計(jì)算a/b和(a/b)2,并可根據(jù)以下公式計(jì)算色度值、色調(diào)值和色光值:
色度值=(a2+b2)1/2;
色調(diào)值=tan-1(b/a)(a>0且b>0);
色光值=2000×a/L×(a2+b2)1/2。
通過色差儀測(cè)量的L、a、b,根據(jù)相關(guān)的計(jì)算公式,就可以對(duì)番茄紅素的含量進(jìn)行估測(cè)。利用色差儀快速定量分析番茄果實(shí)中番茄紅素含量的方法。這不僅有利于育種家們快速方便地初選高番茄紅素含量的優(yōu)良基因型,從而提高育種效率,而且也為番茄果實(shí)番茄紅素含量的測(cè)定提供了一種快速無(wú)損的方法。
該法是借助色差儀,從亮度、紅綠程度和黃藍(lán)程度三個(gè)不同顏色變化方向,對(duì)果實(shí)表面顏色進(jìn)行描述和測(cè)定,每個(gè)樣品測(cè)定結(jié)果都含有I、a和b三個(gè)值。目前,該法除了在番茄上,還在其他多種園藝作物,如茄子、黃瓜、辣椒等的果實(shí)表面顏色測(cè)定中有著廣泛的應(yīng)用。
存在不足是在果色遺傳研究過程中,對(duì)所建立的雜交后代分離群體進(jìn)行測(cè)量時(shí),每個(gè)樣品的測(cè)定結(jié)果,都有三個(gè)指標(biāo),即不能把顏色用一個(gè)確切數(shù)值表示出來,造成后期果色分級(jí)和分類時(shí),L、a和b的范圍存在一定的重疊,即在一定水平上降低了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
首先需要把色差儀放在一個(gè)平穩(wěn)的工作臺(tái)上,接通電源后開機(jī)
每天打開色差儀時(shí),均可在顯示屏看到一個(gè)校正提示。初始校正可以反復(fù)按向下箭頭鍵直至菜單顯示,然后當(dāng)“儀器校正”被高光后,按測(cè)試鍵。根據(jù)測(cè)量物品設(shè)置校正時(shí)間,比較精準(zhǔn)的建議每次開機(jī)校正一次。
在校正后,應(yīng)立即將切換模式開關(guān)扳至問號(hào)圖標(biāo)指示的位置進(jìn)入設(shè)置模式,測(cè)量已經(jīng)賦值的番茄紅色板。標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)測(cè)出在所賦L、a、b值的±0.2以內(nèi)。并且利用向上/向下箭頭輸入番茄紅色板的賦值作為標(biāo)準(zhǔn)。
切換“模式開關(guān)”至測(cè)試位,如色差儀已進(jìn)入待機(jī)模式,則按測(cè)試鍵開啟,把樣品杯孔扳放在測(cè)試孔上校正色差儀,按向下箭頭鍵直至得到在頂部列出設(shè)臵名稱的屏幕,按左或右箭頭鍵直至所需的設(shè)臵顯示。例如要測(cè)量醬,按左或右箭頭鍵直至屏幕頂部顯示“番茄醬”,攪和番茄產(chǎn)品使其均勻,但不要把空氣引入樣品,番茄糊在測(cè)量前只可用蒸餾水稀釋到Brix為8.5,將樣品注入或舀入2.5英寸(64mm)玻璃樣品杯直至杯幾乎滿,將樣品杯放在樣品孔板的凹陷區(qū),用樣品杯不透明罩罩住樣品杯; 按測(cè)試鍵測(cè)量樣品;
如果想要打印測(cè)量值,按向上箭頭/打印鍵。按此鍵也將保存測(cè)量到數(shù)據(jù)庫(kù);
從樣品口移去樣品杯,并小心洗滌后晾干。
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